产品介绍
ESF 921™昆虫细胞培养基是一种完全无血清,无蛋白质的培养基。用于多种昆虫细胞(包括Sf9、Sf21、Tni (High Five™)和果蝇S2)的细胞生长、蛋白质和杆状病毒载体产生。
ESF 921含有L -谷氨酰胺和Kolliphor®P188 (Pluronic F68)。
Expression Systems的昆虫细胞培养基被广泛认为是BEVS应用的行业标准。
产品信息
ESF921是一个1倍完整的不用稀释、即用的培养基。无需添加谷氨疏胺或表面活性剂,如泊洛沙姆188;不推荐使用抗生素,然而,必要时,可以使用青霉素-链备素( 双抗)或庆大霉素(三抗 )。
安全信息
请阅读安全数据表(SDS),并遵循操作说明: 佩戴适当的防护眼镜、衣服和手套。
培养条件
培养基: ESF 921
细胞系(s): Sf9、Sf21、Tni、S2
培养类型: 悬浮培养和贴壁培养
推荐培养容器: 摇瓶或转瓶
温度范围: 27°C至28°C
培养箱: 干燥,无二氧化碳环境。确保适当的气体交换,尽量减少培养物暴露在光线下。
单层细胞培养
1.使用倒置显微镜观赛单层细胞,以确保融合: 使用无菌移液管或通过抽吸法去除培养基和任何漂浮的细胞。2.向烧瓶中加入4ml(每25平方厘米)ESF 921通过反复将培养基移过单层来重悬细胞;可能有必要通过轻烧瓶的侧面来帮助细胞脱离表面张力。
3.测定细胞悬液的活细胞密度。
4.接种0.5-1 x10细胞(每25平方厘米)到室温ESF 921(每25平方厘米5 mL)的新培养瓶中5.在干燥、无二氧化碳培养箱中以27°C培养,松开瓶盖或使用带有换气口的烧瓶(推荐)。
细胞对于ESF 921培养基的使用驯化
细胞适应ESF 921培养基时,建议使用梯度适应。在开始适应过程之前,细胞存活率至少要达到95%S9)、93%(Tni)、90%(Sf21)或85%(S2),并且生长速度处于细胞分裂对数生长期。
1. 将细胞传代至esf921与原始培养基的比例为50:50。在适应过程中,按照1 10个细胞/mL的原始播种密度接种。
2. 在干燥、无二氧化碳培养箱中以27°C培养,在轨道摇床平台上以120-140 rpm旋转摇瓶培养物。松开盖子,允许气体交换。
3. 当活细胞数量为4-6 x 105个/ mL时传代(分裂后3-4天),按照75:25的比例放入ESF 921原始培养基中。
4.重复上一步,增加ESF 921与原始培养基的比例(75: 25,然后是88: 12,95: 5),直到使用 ESF 921。可能需要在-种比例的情况下传代多次。
5.昆虫细胞在适应过程中可能会膨胀。膨胀2-3微米是正常现象,5微米以上是细胞应激培养的提醒,应该用一批新的细胞重新开始适应。
在 ESF 921中传代几次后,活细胞计数应符合上表,存活率>
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