概要说明
API 50 CH 是一个标准化的鉴定系统,它采用 50 个生化试验用来对微生物的碳水化合物的代谢进行研究. API 50 CH与 API 50 CHL 培养基配合使用,用以鉴定乳酸杆菌和相关细菌,与 API 50 CHB 培养基配合使用,用以鉴定芽孢杆菌及相关细菌,肠杆菌科细菌和弧菌科细菌.该系统能够鉴定的全部细菌列在相应的表格中.
原理
API 50 CH 试条由 50 个微量孔组成,用以研究碳水化合物及其衍生物(heterosides,多元醇,糖醛酸)底物的发酵.用 API 59 CHL 或 API 50 CHB 培养基接种试条,使底物水解,然后检测发酵试验。试条孵育过程中,试条上的小管内在厌氧环境下产酸,PH改变而使培养基中指示剂颜色变化,由此可观察到发酵作用。试条上*孔中不含任何活性成分,以此作为阴性控制。
注:API 50 CH 试条可用来检测两条途径
- 氧化作用 细菌通过需氧产酸,使试条孔中 PH 指示剂颜色改变。
- 同化作用 当细菌可利用底物中的不同物质为*碳源时,试条上的孔中即可显示明显的细菌生长。
此时应根据所测试细菌的代谢和营养要求选择培养基接种试条(见参考文献)。
试条组成 (每盒含 10 个测试 ) :
- 10 个API 50 H 试条
- 10 个接种盒
- 10 张结果记录单
- 1 份说明书
试条成分
API 50 CH 试条的成分列于下表中.
可根据所使用的不同底物来调整上述各成分的含量。
必须但未提供的试剂和材料
试剂 :
- 接种培养基
API 50 CHL 培养基(产品号.50410)
API 50 CHB/E 培养基(产品号.50430)
(指本说明书中提到的培养基或其他适合的培养基)
- 矿物油 (产品号. 70 100)
- McFarland 标准比浊管 (产品号. 70 900),或
DENSIMAT 比浊仪(产品号.99234),或
ATB Densitometer
- 鉴定软件(请与生物梅里埃公司联系)
材料:
- 移液管或聚苯乙烯滴管
- 安瓶架
- 安瓶保护套
- 棉试子
- 微生物实验室常规设备
警告和注意事项
只适用于体外诊断和微生物的控制
只适用于专业人员使用
此试剂盒中含有动物源性成分。已知所使用原始材料和动物的卫生状况不能完全保证其不含传染性的物质,因此我们建议所有样品应被视为具有传染性,并应按通常的安全措施对其进行正确处理。(勿吸入或咽下)
所有标本,细菌培养物,接种物应被视为 具有传染性并应进行正确处理。在整个试验过程中,要遵守无菌技术要求和通常使用的防范措施。可参照 NCCLS M29-A 中《保护试验室工作人员免受仪器生物公害和通过血液、体液、组织传染的疾病的侵害》的内容,以及 1997 年 12月核准通过的指导方针。另外的防护措施,可参照《微生物和生物医学实验室的生物研究安全》HHS 出版,No.(CDC) 93-8395,1993 年 5 月第三版。或参照各国正在使用的规章执行。
不要使用过期的试剂
在使用前要检查包装和部件是否完整
不要使用损坏的试条,如杯变形,干燥剂袋开口等。
所提供的操作数据是通过使用本说明书*的步骤获得的,对步骤的任何改变都可能会影响结果。
试验结果的解释应考虑到病人的病史、标本的来源、菌落及菌体的形态学特点,如果需要的话,可参考任何需要的附加实验结果,特别是抗生素敏感试验的结果。
储存条件
试条应在 2-8°C 储存,并于包装盒上指示的有效期前使用。
标本(收集和准备)
API 50 CH 试条不能直接用于临床或是其它标本。
被鉴定的微生物,必须首先根据标准的微生物技术在适当的培养基上进行分离。
使用说明
使用前请仔细阅读相关说明书,根据需要选择 API 50 CHL或 API 50 CHB/E 培养基。
试条的准备
每条试条分别由 5 个小试条组成,每个小试条上有 10 个小管。
准备孵育盒(包括底盘和盖子)
在盒子底盘一端的加长部分记录菌株的编号(不要记录在盖子上,因为操作过程中很容易将盖子错放到其他试条上)
加 10ml 蒸馏水或去离子水(或其他水,但不要含有可释放气体的成分,如*,二氧化碳气等)于孵育盒底盘中,使其填满所有的孔,以保持湿润的气体环境。
从包装袋中取出 2 个试条(0-19,20-39),再把它们分为 4 个小试条(0-9,10-19,20-29,30-39)并全部放在孵育盒底盘中。取出另一个小试条(40-49)放在孵育盒底盘中上述 4 个试条的后面,即完成试条的准备。
接种物的制备
在适当的培养基上接种细菌使其生长。
确认菌株为纯培养物。
使用棉试子从固体培养基上收集菌株,如从液体培养基中收集菌株,则需离心。
在适当的培养基中制备接种物(菌悬液)(参照 API 50CHL 或 API 50 MCHB/E 培养基说明书)菌悬液制备好后,应立即使用。
接种试条
用无菌加样器按下述要求将菌悬液加到试条上的 50 个管中。
将孵育盒底盘向前轻轻倾斜。
使加样器头靠在杯的边缘加入菌悬液,避免产生气泡。
仅加满管的部分,管的上部(杯)不要加菌悬液,这样管内可保持厌氧环境
当菌悬液接种完成后,液面应避免出现新月形的凹陷或凸起。
根据被检细菌的生长需要,将试条放在适当的温度进行孵育:30°C,37°C 或 55°C。
判读和解释
试条判读
根据细菌和所研究反应的类型,在达到了规定的孵育时间后(如 24 小时,48 小时),阅读试条。
解释
以阳性(+), 阴性(-),可疑(?)来解释每一个试验,将结果记录在结果记录单上.
结果可产生生化反应谱,将其输入到乳酸杆菌和相关细菌,芽孢杆菌和相关细菌,肠杆菌科细菌和弧菌科细菌的鉴定软件中,即可得到鉴定结果.
注:该结果可用于其他目的:
- 不同型的细菌可用于流行病学的分群.
- 对一群细菌的分类学分析.
- 对未知类细菌进行分群.
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